二氧化碳培養(yǎng)箱的清潔、消毒和滅菌處理

二氧化碳培養(yǎng)箱是在普通培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，通過(guò)在培養(yǎng)箱內(nèi)模擬形成一個(gè)類似細(xì)胞在生物體內(nèi)的生長(zhǎng)環(huán)境，如合適的溫度（37°C）、恒定的二氧化碳水平（常用5%）、穩(wěn)定的酸堿度（pH值7.2-7.4）、較高的相對(duì)飽和濕度（常用95%），來(lái)對(duì)細(xì)胞或組織進(jìn)行體外培養(yǎng)的一種裝置。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)、微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)、組織學(xué)實(shí)驗(yàn)以及分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。因此，二氧化碳培養(yǎng)箱的消毒、滅菌尤為重要。 

凡混入二氧化碳培養(yǎng)箱（細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境）中，對(duì)細(xì)胞生存有害的成分或造成細(xì)胞不純的異物都應(yīng)視為污染。細(xì)胞持續(xù)在污染環(huán)境中生長(zhǎng)時(shí)，輕者生長(zhǎng)緩慢、分化變形，較嚴(yán)重的情況則細(xì)胞增殖停止，從瓶壁脫落，甚至死亡。不同的污染物對(duì)細(xì)胞的影響也有差別，有的影響是長(zhǎng)期、緩慢和潛在的，有的則在很短的時(shí)間內(nèi)抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，或產(chǎn)生有毒物質(zhì)滅細(xì)胞。根據(jù)污染源不同主要可以分為：生物性污染、化學(xué)性污染、物理性污染和氣溶膠污染。

這是最常見(jiàn)也是危害最大的污染，如細(xì)菌、病毒、真菌，支原體等。這些污染源有可能是人為帶入，或是細(xì)胞在放入培養(yǎng)箱之前已經(jīng)被污染，再或者是箱體本身沒(méi)有消毒干凈。體外培養(yǎng)的細(xì)胞自身沒(méi)有抵抗污染的能力，而培養(yǎng)基中所加抗生素的抗微生物污染的能力也有限，因此細(xì)胞微生物污染一旦發(fā)生往往無(wú)法挽救。

培養(yǎng)箱中許多化學(xué)物質(zhì)都會(huì)引起細(xì)胞污染，如細(xì)胞培養(yǎng)容器清洗過(guò)程中殘留的洗滌劑、加濕器中未純化的水、人為帶入的液體或氣體。不同化學(xué)物質(zhì)對(duì)細(xì)胞污染是不一樣的，有的可能促進(jìn)或抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，有的可能殺死細(xì)胞。

培養(yǎng)環(huán)境中的物理因素，如溫度、放射線、振動(dòng)、輻射（紫外線或熒光）會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生影響。物理性污染常常被人們所忽視，或被籠統(tǒng)地歸為化學(xué)性污染。其主要是在代謝水平或分子水平上，影響細(xì)胞正常的生理過(guò)程。

氣溶膠是液體或固體微粒均勻地懸浮在氣體介質(zhì)中的分散體系，當(dāng)微粒是微生物時(shí)，就是微生物氣溶膠，如果這種微生物是病原性的，就是病原微生物氣溶膠。細(xì)菌、病毒等病原體通過(guò)氣溶膠可在人與人、人與環(huán)境之間傳播。

微生物氣溶膠可分為兩大類：一類是飛沫核氣溶膠，另一類是粉塵氣溶膠。醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)許多操作都可以產(chǎn)生氣溶膠，并且大多可能是病原微生物形成的感染性氣溶膠，由于其氣溶膠分子小，漂浮在空氣中、粘附于人身上，易在空氣中擴(kuò)散而污染實(shí)驗(yàn)室的空氣。

（3）清洗玻璃門：清洗箱內(nèi)的玻璃門所用的清潔劑與清洗培養(yǎng)箱內(nèi)部時(shí)使用的相同。然后用蒸餾水漂洗，從而清除殘留的清潔劑，最后用軟布把門擦干。

消毒是指殺死微生物的物理或化學(xué)手段，但不一定殺死其孢子。滅菌是指殺死所有微生物，當(dāng)培養(yǎng)箱內(nèi)細(xì)胞受到污染時(shí)需采用滅菌措施。一般，在培養(yǎng)箱內(nèi)細(xì)胞沒(méi)有污染的情況下平均1-3個(gè)月消毒一次。常用的三種消毒滅菌的方式是：液體消毒劑、紫外和加熱。

（1）液體消毒劑：選擇對(duì)培養(yǎng)箱無(wú)腐蝕性的液體消毒劑。液體消毒劑的消毒效果好壞和很多因素有關(guān)，比如場(chǎng)所的溫度、接觸時(shí)間、pH、穿透能力、有機(jī)物的反應(yīng)，這些因素中一些很小的變化可能造成去污效果的不同。因此液體去污劑不是可信賴的方法。

（2）紫外：一般先用蒸餾水清洗干凈后，再用紫外燈照射（帶紫外燈的培養(yǎng)箱）一天，或者用手提式的紫外燈照射。

（3）加熱：濕熱和干熱被認(rèn)為是殺菌有效的方法。干熱160℃-170℃、2-4小時(shí)在不具有滲透性、非有機(jī)體的物質(zhì)（如玻璃）是可行的凈化方法, 但是甚至在有機(jī)體或非有機(jī)體的淺層也不能被絕緣。

（3）揮發(fā)性的甲醛有毒、易燃、易爆。如果在培養(yǎng)箱內(nèi)殘留甲醛的話，會(huì)影響細(xì)胞正常生長(zhǎng)，甚至使細(xì)胞死亡。

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